케이랩(주)에서 제공한 'MRX A2000 마이크로플레이트 리더의 워크플로 기능을 이용한 Bradford Protein Assay 수행 예제'에 관한 응용자료의 주요 내용은 다음과 같다.
개요
Bradford Protein Assay는 Coomassie Brilliant Blue G-250 염료가 단백질과 결합할 때 발생하는 흡광도 변화를 이용하여 단백질 농도를 정량하는 대표적인 비색 분석법이다. 단백질과 결합한 염료는 청색으로 발색하며, 생성된 복합체의 흡광도를 측정하여 시료의 단백질 농도를 정량할 수 있다.
본 어플리케이션 노트에서는 PierceTM Bradford Plus Protein Assay Kit를 이용하여 BSA 표준용액의 검량선을 작성하고, MRX A2000 마이크로플레이트 리더(Microplate Reader)를 이용하여 Bradford Protein Assay를 수행하는 과정을 소개하였다. 또한 MRX A2000의 워크플로 기능을 이용한 자동 측정과 MRX View 2.0을 이용한 검량선 작성 및 데이터 분석 과정을 함께 제시하였다.
[그림 1]. 케이랩(주)(K LAB)의 MRX A2000 마이크로플레이트 리더
재료 및 방법
시약 및 장비
본 시험은 MRX A2000 마이크로플레이트 리더와 MRX View 2.0 소프트웨어를 이용하여 수행하였다. 단백질 정량은 PierceTM Bradford Protein Assay Kit(Thermo Fisher Scientific, Cat. No. A55866)를 사용하였으며, 키트에 포함된 PierceTM Dilution-FreeTM BSA Protein Standards(REF 1863881)를 표준물질로 사용하였다. 측정은 96웰 마이크로플레이트(SPL Life Sciences, Cat. No. 32396)를 이용하였다.
시험 방법
PierceTM Bradford Protein Assay Kit의 사용 방법에 따라 Bradford Protein Assay를 수행하였다. BSA 표준용액은 125-2,000 μg/mL와 1-25 μg/mL의 두 농도 범위로 구분하여 각각 검량선을 작성하였다. 두 농도 범위는 BSA 표준용액과 Bradford Reagent의 분주량을 달리하여 준비하였으며, 분주 조건은 [표 1]과 같다.
[표 1]. BSA 농도 범위에 따른 표준용액 및 Bradford Reagent 분주 조건
분주가 완료된 플레이트는 MRX A2000에서 측정하였다. 측정은 워크플로 기능을 이용하여 수행하였다. 워크플로는 셰이킹(Shaking), 지연(Delay), 측정, 프롬프트(Prompt) 등을 사용자가 원하는 순서로 조합하여 실험에 적합한 자동 측정 절차를 구성하는 기능이다. 본 시험에서는 플레이트 장착, 셰이킹, 10분간의 반응 및 흡광도 측정을 하나의 워크플로로 구성하였다. 워크플로 구성 예시는 [그림 2]에, 측정 조건은 [표 2]에 나타내었다.
[그림 2]. Bradford Protein Assay를 위한 MRX A2000 워크플로 예시
[표 2]. MRX A2000 워크플로 측정 조건
워크플로를 시작하면 플레이트 트레이가 열리고 플레이트 장착을 안내하는 프롬프트 창이 표시된다. 사용자는 시약 분주를 완료한 플레이트를 트레이에 장착한 후 확인 버튼만 누르면 된다. 이후 MRX A2000은 설정된 워크플로에 따라 셰이킹을 수행하고, 실온에서 10분간 반응시킨 후 흡광도를 자동으로 측정한다.
[그림 3]. MRX A2000 워크플로를 이용한 Bradford Protein Assay 자동 측정 과정 – 사용자는 시약을 분주한 96웰 플레이트를 장착하고 확인 버튼을 누르면 되며, 이후 셰이킹, 반응 및 흡광도 측정은 설정된 워크플로에 따라 자동으로 수행된다.
결과
BSA 표준용액을 이용하여 125-2,000 μg/mL와 1-25 μg/mL의 두 농도 범위에서 검량선을 작성하였다. 평균 흡광도는 블랭크(blank)의 평균 흡광도를 차감한 값을 사용하였으며, 검량선 작성과 데이터 분석은 MRX View 2.0에서 수행하였다.
125-2,000 μg/mL 농도 범위에서는 각 농도를 3회 반복 측정(n=3)하였다. 측정 결과, 고농도 구간에서는 농도가 증가함에 따라 흡광도의 증가가 점차 완만해지는 경향을 나타냈다. 이에 따라 전체 농도 범위를 하나의 선형 회귀식으로 해석하기보다 Polynomial 회귀를 적용하여 검량선을 작성하였다. 발색 결과는 [그림 4]에, 검량선 작성 결과는 [표 3]과 [그림 5]에 나타내었다.
[그림 4]. 125-2,000 μg/mL 농도 범위의 Bradford Protein Assay 발색 결과 – 단백질 농도가 증가함에 따라 청색 발색이 진해지는 것을 확인할 수 있다.
[표 3]. 125-2,000 μg/mL 농도 범위의 검량선 작성 결과
[그림 5]. MRX View 2.0에서 작성된 125-2,000 μg/mL 농도 범위의 Bradford Protein Assay 검량선 – 2차 Polynomial 회귀를 적용하여 검량선을 작성하였으며, 결정계수(R²)는 0.9986으로 확인되었다.
1-25 μg/mL 농도 범위에서는 각 농도를 2회 반복 측정(n=2)하였다. 측정 범위에서 흡광도와 농도는 선형적인 관계를 나타내었으며, 이에 따라 Linear 회귀를 적용하여 검량선을 작성하였다. 발색 결과는 [그림 6]에, 검량선 작성 결과는 [표 4]와 [그림 7]에 나타내었다
[그림 6]. 1-25 μg/mL 농도 범위의 Bradford Protein Assay 발색 결과
[표 4]. 1-25 μg/mL 농도 범위의 검량선 작성 결과
[그림 7]. MRX View 2.0에서 작성된 1-25 μg/mL 농도 범위의 Bradford Protein Assay 검량선 – Linear 회귀를 적용하여 검량선을 작성하였으며, 결정계수(R²)는 0.9967로 확인되었다.
결론
본 시험에서는 PierceTM Bradford Plus Protein Assay Kit와 MRX A2000을 이용하여 Bradford Protein Assay를 수행하고, 농도 범위에 따라 적합한 회귀식을 적용하여 검량선을 작성하였다. 또한 MRX View 2.0을 이용한 검량선 작성 및 데이터 분석과 MRX A2000의 워크플로 기능을 이용한 자동 측정을 통해 Bradford Protein Assay를 효율적으로 수행할 수 있음을 확인하였다.
‘MRX A2000 마이크로플레이트 리더의 워크플로 기능을 이용한 Bradford Protein Assay 수행 예제’에 관한 궁금한 내용은 본 원고 자료를 제공한 케이랩(주)을 통하여 확인 가능하다.
참고문헌(Reference): Bradford, M. M. (1976). A rapid and sensitive method for the quantitation of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein-dye binding. Analytical Biochemistry, 72, 248–254.
- Thermo Fisher Scientific. Pierce™ Bradford Plus Protein Assay Kit with Dilution-Free™ BSA Protein Standards, Multichannel Pipette Compatible, User Guide. Cat. No. A55866. Thermo Fisher Scientific.
Model Name(모델명): MRX A2000 Microplate Reader
The Person in Charge(담당자): Ji－su Kim
Maker(제조사): K LAB
Country of Origin(원산지): Korea
e-mail: mint5135@klab.im
Data Services(자료제공): K LAB
<이 기사는 사이언스21 매거진 2026년 9월호에 게재 되었습니다.>
[그림 1]. 케이랩(주)(K LAB)의 MRX A2000 마이크로플레이트 리더재료 및 방법시약 및 장비본 시험은 MRX A2000 마이크로플레이트 리더와 MRX View 2.0 소프트웨어를 이용하여 수행하였다. 단백질 정량은 PierceTM Bradford Protein Assay Kit(Thermo Fisher Scientific, Cat. No. A55866)를 사용하였으며, 키트에 포함된 PierceTM Dilution-FreeTM BSA Protein Standards(REF 1863881)를 표준물질로 사용하였다. 측정은 96웰 마이크로플레이트(SPL Life Sciences, Cat. No. 32396)를 이용하였다.시험 방법PierceTM Bradford Protein Assay Kit의 사용 방법에 따라 Bradford Protein Assay를 수행하였다. BSA 표준용액은 125-2,000 μg/mL와 1-25 μg/mL의 두 농도 범위로 구분하여 각각 검량선을 작성하였다. 두 농도 범위는 BSA 표준용액과 Bradford Reagent의 분주량을 달리하여 준비하였으며, 분주 조건은 [표 1]과 같다.[표 1]. BSA 농도 범위에 따른 표준용액 및 Bradford Reagent 분주 조건
분주가 완료된 플레이트는 MRX A2000에서 측정하였다. 측정은 워크플로 기능을 이용하여 수행하였다. 워크플로는 셰이킹(Shaking), 지연(Delay), 측정, 프롬프트(Prompt) 등을 사용자가 원하는 순서로 조합하여 실험에 적합한 자동 측정 절차를 구성하는 기능이다. 본 시험에서는 플레이트 장착, 셰이킹, 10분간의 반응 및 흡광도 측정을 하나의 워크플로로 구성하였다. 워크플로 구성 예시는 [그림 2]에, 측정 조건은 [표 2]에 나타내었다.
[그림 2]. Bradford Protein Assay를 위한 MRX A2000 워크플로 예시[표 2]. MRX A2000 워크플로 측정 조건
워크플로를 시작하면 플레이트 트레이가 열리고 플레이트 장착을 안내하는 프롬프트 창이 표시된다. 사용자는 시약 분주를 완료한 플레이트를 트레이에 장착한 후 확인 버튼만 누르면 된다. 이후 MRX A2000은 설정된 워크플로에 따라 셰이킹을 수행하고, 실온에서 10분간 반응시킨 후 흡광도를 자동으로 측정한다.
[그림 3]. MRX A2000 워크플로를 이용한 Bradford Protein Assay 자동 측정 과정 – 사용자는 시약을 분주한 96웰 플레이트를 장착하고 확인 버튼을 누르면 되며, 이후 셰이킹, 반응 및 흡광도 측정은 설정된 워크플로에 따라 자동으로 수행된다.결과BSA 표준용액을 이용하여 125-2,000 μg/mL와 1-25 μg/mL의 두 농도 범위에서 검량선을 작성하였다. 평균 흡광도는 블랭크(blank)의 평균 흡광도를 차감한 값을 사용하였으며, 검량선 작성과 데이터 분석은 MRX View 2.0에서 수행하였다.125-2,000 μg/mL 농도 범위에서는 각 농도를 3회 반복 측정(n=3)하였다. 측정 결과, 고농도 구간에서는 농도가 증가함에 따라 흡광도의 증가가 점차 완만해지는 경향을 나타냈다. 이에 따라 전체 농도 범위를 하나의 선형 회귀식으로 해석하기보다 Polynomial 회귀를 적용하여 검량선을 작성하였다. 발색 결과는 [그림 4]에, 검량선 작성 결과는 [표 3]과 [그림 5]에 나타내었다.
[그림 4]. 125-2,000 μg/mL 농도 범위의 Bradford Protein Assay 발색 결과 – 단백질 농도가 증가함에 따라 청색 발색이 진해지는 것을 확인할 수 있다.[표 3]. 125-2,000 μg/mL 농도 범위의 검량선 작성 결과
[그림 5]. MRX View 2.0에서 작성된 125-2,000 μg/mL 농도 범위의 Bradford Protein Assay 검량선 – 2차 Polynomial 회귀를 적용하여 검량선을 작성하였으며, 결정계수(R²)는 0.9986으로 확인되었다.1-25 μg/mL 농도 범위에서는 각 농도를 2회 반복 측정(n=2)하였다. 측정 범위에서 흡광도와 농도는 선형적인 관계를 나타내었으며, 이에 따라 Linear 회귀를 적용하여 검량선을 작성하였다. 발색 결과는 [그림 6]에, 검량선 작성 결과는 [표 4]와 [그림 7]에 나타내었다
[그림 6]. 1-25 μg/mL 농도 범위의 Bradford Protein Assay 발색 결과[표 4]. 1-25 μg/mL 농도 범위의 검량선 작성 결과
[그림 7]. MRX View 2.0에서 작성된 1-25 μg/mL 농도 범위의 Bradford Protein Assay 검량선 – Linear 회귀를 적용하여 검량선을 작성하였으며, 결정계수(R²)는 0.9967로 확인되었다.결론본 시험에서는 PierceTM Bradford Plus Protein Assay Kit와 MRX A2000을 이용하여 Bradford Protein Assay를 수행하고, 농도 범위에 따라 적합한 회귀식을 적용하여 검량선을 작성하였다. 또한 MRX View 2.0을 이용한 검량선 작성 및 데이터 분석과 MRX A2000의 워크플로 기능을 이용한 자동 측정을 통해 Bradford Protein Assay를 효율적으로 수행할 수 있음을 확인하였다.‘MRX A2000 마이크로플레이트 리더의 워크플로 기능을 이용한 Bradford Protein Assay 수행 예제’에 관한 궁금한 내용은 본 원고 자료를 제공한 케이랩(주)을 통하여 확인 가능하다.참고문헌(Reference): Bradford, M. M. (1976). A rapid and sensitive method for the quantitation of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein-dye binding. Analytical Biochemistry, 72, 248–254.- Thermo Fisher Scientific. Pierce™ Bradford Plus Protein Assay Kit with Dilution-Free™ BSA Protein Standards, Multichannel Pipette Compatible, User Guide. Cat. No. A55866. Thermo Fisher Scientific.Model Name(모델명): MRX A2000 Microplate ReaderThe Person in Charge(담당자): Ji－su KimMaker(제조사): K LABCountry of Origin(원산지): Koreae-mail: mint5135@klab.imData Services(자료제공): K LAB<이 기사는 사이언스21 매거진 2026년 9월호에 게재 되었습니다.>