케이랩(주)에서 제공한 'POP UV-Vis와 PierceTM 660nm Protein Assay 기반 소량 단백질 샘플 분석 솔루션'에 관한 응용자료의 주요 내용은 다음과 같다.
1. 개요
본 실험에서는 K LAB의 POP UV-Vis 분광광도계와 Microvolume Cell Holder를 활용해, 단 10μL의 단백질 샘플로도 PierceTM 660nm Protein Assay를 수행할 수 있는 소량 단백질 정량 분석 솔루션을 소개한다.
POP은 실험실에서 널리 사용되는 표준형 UV-Vis 분광광도계로, 다양한 액세서리와의 호환성을 바탕으로 분석 목적에 따라 유연한 셀 구성이 가능하다는 장점이 있다. 특히 Microvolume Cell Holder를 장착하면, 최소 70μL의 용액으로 측정이 가능한 일회용 Micro Cuvette 사용이 가능해져, 극소량 시료 분석에 효과적으로 대응할 수 있다.
PierceTM 660nm Protein Assay는 단백질과 시약 반응을 통해 형성된 청자색 착화합물의 흡광도(660nm)를 측정하여 단백질 농도를 정량하는 분석법이다.
[그림 1]. K LAB의 UV-Vis 분광광도계 POP(K LAB, UNT0006)
2. 실험 조건
2-1. 실험 장비
- POP, UV-Vis 분광광도계(K LAB, UNT0006)
- Microvolume Cell Holder(K LAB, ACC0031)
- Disposable Micro Cuvette(BRAND GMBH, 759200)
- 10 ~ 1000μL pipettors
- 1.5mL Micro Tube
2-2. 시약
- Protein Standard-analytical standard, 200mg/mL(BSA) (Sigma, P5369)
- PierceTM 660nm Protein Assay Reagent(Thermo ScientifiTM, 22660)
- Deionized Water
[그림 2]. Micro Cuvette(BRAND GMBH, 759200)과 POP의 Microvolume Cell Holder(K LAB, ACC0031)
▶ POP은 기본적으로 8셀 멀티 셀 홀더를 제공하지만, Microvolume Cell Holder 등 다양한 액세서리와 호환되어 유연한 실험 구성이 가능하다.
3. 실험 절차
3-1. BSA 표준 용액 제조
본 실험에서는 Protein Standard-analytical standard, 200mg/mL(Sigma, P5369)을 희석하여 최초 2,000μg/mL 용액을 준비한 후, 이를 1/2씩 단계 희석하여 2,000μg/mL부터 62.5μg/mL까지 총 6개의 표준 용액을 제조하였다.
3-2. 시험 절차
① BSA 표준용액과 Blank 샘플을 1.5mL 마이크로 튜브에 10μL씩 분주하고, PierceTM 660nm Protein Assay Reagent(Thermo ScientificTM, 22660)을 150μL씩 첨가하여 혼합한다.
② 혼합 시료는 상온에서 5분간 반응시킨다.
③ 반응 완료 후, 혼합 시료 70μL를 Disposable Micro Cuvette에 옮겨 담는다.
[그림 3]. Pierce 660nm Assay 반응 후 Micro Cuvette에 담긴 Blank 및 BSA 표준 용액 (62.5 ~ 2,000)μg/mL
▶ 반응 완료 후, 단백질 농도에 따라 청자색으로 발색되는 정도가 달라지는 것을 확인할 수 있다.
⑤ [Photometric] 모드를 선택하여 측정모드로 진입한다.
[그림 4]. POP의 [Photometric] 모드 선택 화면
⑥ 장비에 Blank 시료를 삽입하고 제로(Blank) 흡광도를 설정한다.
⑦ 이후 각 BSA 표준용액을 순차적으로 장비에 삽입하며 660nm에서 흡광도를 측정한다.
4. 실험 결과
PierceTM 660nm Protein Assay를 활용하여 제조된 BSA 표준 용액(62.5 ~ 2,000)μg/mL를 대상으로 5회 반복 측정을 수행하였으며, 해당 결과는 [표 1]과 [그림 5]에 정리되어 있다.
표준 편차 및 %CV를 기반으로 분석 재현성을 평가한 결과, 62.5μg/mL에서 %CV는 2.2%였으며, 나머지 구간은 모두 2.2% 이하의 정밀성을 확인하였다.
또한, 660nm에서 측정한 흡광도를 기준으로 작성한 표준 곡선은 결정계수(R2) 0.9995로 높은 선형성을 유지함을 확인하였다.
[표 1]. BSA 표준 용액 (62.5 ~ 2,000)μg/mL 반복 측정 결과 (n=5), 모든 구간에 대해서 %CV가 2.2% 이하로 나타남.
[그림 5]. 660nm에서 측정한 BSA 표준 용액의 농도-흡광도 표준 곡선, 결정계수(R2)는 0.9995로 높은 선형성을 보임.
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5. 결론
본 노트에서는 K LAB의 POP UV-Vis 분광광도계와 Microvolume Cell Holder를 활용하여, Pierce™ 660nm Protein Assay 기반의 소량 단백질 정량 분석 성능을 평가하였다.
▶ 단백질 시료 10μL를 사용한 70μL 반응 혼합물 측정 결과, 흡광도 재현성 지표인 %CV는 최대 2.2% 이내로 확인.
▶ 측정된 흡광도 값을 기반으로 작성된 표준 곡선의 결정계수(R2)는 0.9995로, 해당 농도 범위에서 Pierce™ 660nm Protein Assay가 우수한 선형성을 유지함을 확인.
Reference(참고문헌): Pierce™ 660nm Protein Assay Manual(Thermo Scientific, MAN0016386)
Model Name(모델명): POP UV-Vis Spectrophotometer
The Person in Charge(담당자): Jisu Kim
Maker(제조사): K LAB
Country of Origin(원산지): Korea
e-mail: mint5135@klab.im
Data Services(자료제공): K LAB
| <이 기사는 사이언스21 매거진 2025년 5월호에 게재 되었습니다.> |
[그림 1]. K LAB의 UV-Vis 분광광도계 POP(K LAB, UNT0006)2. 실험 조건2-1. 실험 장비- POP, UV-Vis 분광광도계(K LAB, UNT0006)- Microvolume Cell Holder(K LAB, ACC0031)- Disposable Micro Cuvette(BRAND GMBH, 759200)- 10 ~ 1000μL pipettors- 1.5mL Micro Tube2-2. 시약- Protein Standard-analytical standard, 200mg/mL(BSA) (Sigma, P5369)- PierceTM 660nm Protein Assay Reagent(Thermo ScientifiTM, 22660)- Deionized Water
[그림 2]. Micro Cuvette(BRAND GMBH, 759200)과 POP의 Microvolume Cell Holder(K LAB, ACC0031)▶ POP은 기본적으로 8셀 멀티 셀 홀더를 제공하지만, Microvolume Cell Holder 등 다양한 액세서리와 호환되어 유연한 실험 구성이 가능하다.3. 실험 절차3-1. BSA 표준 용액 제조본 실험에서는 Protein Standard-analytical standard, 200mg/mL(Sigma, P5369)을 희석하여 최초 2,000μg/mL 용액을 준비한 후, 이를 1/2씩 단계 희석하여 2,000μg/mL부터 62.5μg/mL까지 총 6개의 표준 용액을 제조하였다.3-2. 시험 절차① BSA 표준용액과 Blank 샘플을 1.5mL 마이크로 튜브에 10μL씩 분주하고, PierceTM 660nm Protein Assay Reagent(Thermo ScientificTM, 22660)을 150μL씩 첨가하여 혼합한다.② 혼합 시료는 상온에서 5분간 반응시킨다.③ 반응 완료 후, 혼합 시료 70μL를 Disposable Micro Cuvette에 옮겨 담는다.
[그림 3]. Pierce 660nm Assay 반응 후 Micro Cuvette에 담긴 Blank 및 BSA 표준 용액 (62.5 ~ 2,000)μg/mL▶ 반응 완료 후, 단백질 농도에 따라 청자색으로 발색되는 정도가 달라지는 것을 확인할 수 있다.⑤ [Photometric] 모드를 선택하여 측정모드로 진입한다.
[그림 4]. POP의 [Photometric] 모드 선택 화면⑥ 장비에 Blank 시료를 삽입하고 제로(Blank) 흡광도를 설정한다.⑦ 이후 각 BSA 표준용액을 순차적으로 장비에 삽입하며 660nm에서 흡광도를 측정한다.4. 실험 결과PierceTM 660nm Protein Assay를 활용하여 제조된 BSA 표준 용액(62.5 ~ 2,000)μg/mL를 대상으로 5회 반복 측정을 수행하였으며, 해당 결과는 [표 1]과 [그림 5]에 정리되어 있다.표준 편차 및 %CV를 기반으로 분석 재현성을 평가한 결과, 62.5μg/mL에서 %CV는 2.2%였으며, 나머지 구간은 모두 2.2% 이하의 정밀성을 확인하였다.또한, 660nm에서 측정한 흡광도를 기준으로 작성한 표준 곡선은 결정계수(R2) 0.9995로 높은 선형성을 유지함을 확인하였다.
[표 1]. BSA 표준 용액 (62.5 ~ 2,000)μg/mL 반복 측정 결과 (n=5), 모든 구간에 대해서 %CV가 2.2% 이하로 나타남.
[그림 5]. 660nm에서 측정한 BSA 표준 용액의 농도-흡광도 표준 곡선, 결정계수(R2)는 0.9995로 높은 선형성을 보임.'QX Water Analysis Spectrophotometer를 이용한 신속 간편한 암모니아성 질소 분석'에 대한 궁금한 내용은 본 원고자료를 제공한 케이랩(주)를 통하여 확인할 수 있다.5. 결론본 노트에서는 K LAB의 POP UV-Vis 분광광도계와 Microvolume Cell Holder를 활용하여, Pierce™ 660nm Protein Assay 기반의 소량 단백질 정량 분석 성능을 평가하였다.▶ 단백질 시료 10μL를 사용한 70μL 반응 혼합물 측정 결과, 흡광도 재현성 지표인 %CV는 최대 2.2% 이내로 확인.▶ 측정된 흡광도 값을 기반으로 작성된 표준 곡선의 결정계수(R2)는 0.9995로, 해당 농도 범위에서 Pierce™ 660nm Protein Assay가 우수한 선형성을 유지함을 확인.Reference(참고문헌): Pierce™ 660nm Protein Assay Manual(Thermo Scientific, MAN0016386)Model Name(모델명): POP UV-Vis SpectrophotometerThe Person in Charge(담당자): Jisu KimMaker(제조사): K LABCountry of Origin(원산지): Koreae-mail: mint5135@klab.imData Services(자료제공): K LAB